INTERPROFESSSIONEL
DE LA N° de contrat : 05/02/AC/M0
VIGNE
ET DU VIN (ITV France)
Nom de la Société :
Laboratoire ACI
46,
Avenue Gustave Eiffel – BP39537
37095
TOURS CEDEX 2
Tél
: 02 47 88 24 20
Fax
: 02 47 88 24 21
ÉTUDE AU LABORATOIRE DU POUVOIR FONGICIDE DU PRODUIT DESINFECTANT DESOGERME NMI® SUR L’ESPECE
Travaux réalisés par : Pascal POUPAULT, Ingénieur ITV France - Unité de
TOURS
§
La souche de Brettanomyces
utilisée pour l’étude est la souche L871, de la collection ITV France-Unité de
Tours, isolée en 2002,
§
cette souche a été mise en culture sur milieu YM, 4
jours à 28°C, avant l’essai,
§
le produit désinfectant DESOGERME NMI® est testé aux
concentrations suivantes : 1% et 2% volume, par contact avec les cellules
de levures en milieu liquide, à température contrôlée de 20°C. Les temps de
contact avec le produit désinfectant sont de 5 et 15 minutes,
§
le tableau 1 reprend l’ensemble des modalités de
l’étude, initialement prévues,
§
tous les tubes ont été répétés pour une meilleure
interprétation.
|
Modalité |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
|
Diluent (eau stérile) (ml) |
9 |
9 |
8 |
8 |
7 |
7 |
9 |
9 |
8 |
8 |
7 |
7 |
|
Suspension de levures à 107 germes/ml pour avoir 106 germes/ml dans le tube (ml) |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
|
Suspension de levures à 105 germes/ml pour avoir 104 germes/ml dans le tube (ml) |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
|
DESINFECTANT (ml) Desogerme NMI® à 20% |
0 |
0 |
1 |
1 |
0,5 |
0,5 |
0 |
0 |
1 |
1 |
0,5 |
0,5 |
|
Concentration finale de DESINFECTANT dans le tube (%) |
0 |
0 |
2 |
2 |
1 |
1 |
0 |
0 |
2 |
2 |
1 |
1 |
|
Temps de contact à 20°C (minutes) |
5 |
15 |
5 |
15 |
5 |
15 |
5 |
15 |
5 |
15 |
5 |
15 |
Tableau 1 : Modalités du plan d’essai
Ignorant le comportement de levures à ce genre de formulation (à base de sel de biguanidine), des modalités sont rajoutées au protocole initial (tableau 2) ; la suspension de levures initiales n’y est que de 104 germes/ml, pour avoir 103 germes/ml dans le tube.
|
Modalité |
13 |
14 |
15 |
16 |
17 |
18 |
|
Suspension de levures à 104 germes/ml pour avoir 103 germes/ml dans le tube (ml) |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
|
Diluent (eau stérile) (ml) |
9 |
9 |
8 |
8 |
8,5 |
8,5 |
|
DESINFECTANT (ml) Desogerme NMI® à 20% |
0 |
0 |
1 |
1 |
0,5 |
0,5 |
|
Concentration finale de Desogerme NMI® dans le tube (%) |
0 |
0 |
2 |
2 |
1 |
1 |
|
Temps de contact à 20°C (minutes) |
5 |
15 |
5 |
15 |
5 |
15 |
Tableau 2 : Modalités ajoutées
Ø Les analyses à 5 et 15 minutes sont les suivantes :
§ Témoin non traité (modalité 1, 2, 7, 8, 13, 14) : les populations levuriennes sont dénombrées sur boîte de Pétri sur milieu YM après dilutions appropriées.
§ Lots traités :
ü Filtration de 1ml de l’essai sur membrane stérile de 0,45µm de porosité et rinçage avec 20ml d’eau physiologique, pour mettre fin au contact avec le produit,
ü Incubation des membranes sur milieu YM, 7 jours à 28°C.
Les 3 suspensions de levures sont dénombrées sur cellule de Malassez, puis sur milieu YM gélosé (après dilutions appropriées). Les résultats sont présentés dans le tableau 3.
|
Suspension de levure |
1 |
2 |
3 |
|
Population de levures recherchée (cellules/ml) |
107 |
105 |
104 |
|
Population sur cellule de Malassez (cellules/ml) |
106,2.105 |
/ |
/ |
|
Numération sur milieu gélosé (cellules/ml) |
1,3.107 |
1,4.105 |
1,2.104 |
Tableau 3 : Populations initiales des suspensions de levures
Commentaires :
Les trois suspensions initiales sont très proches des valeurs recherchées.
Pour chacune des modalités, les populations de levures dénombrées sur la membrane, après 7 jours à 28°C, sont présentées sur le tableau 4.
|
Modalité |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
13 |
14 |
15 |
16 |
17 |
18 |
|
Population
initiale en levures (cell/ml) dans le tube |
1,06.106 |
1,06.106 |
1,06.106 |
1,06.106 |
1,06.106 |
1,06.106 |
1,4.104 |
1,4.104 |
1,4.104 |
1,4.104 |
1,4.104 |
1,4.104 |
1200 |
1200 |
1200 |
1200 |
1200 |
1200 |
|
Concentration
(%) du Desogerme NMI® |
0 |
0 |
2 |
2 |
1 |
1 |
0 |
0 |
2 |
2 |
1 |
1 |
0 |
0 |
2 |
2 |
1 |
1 |
|
Temps
de contact (minutes) |
5 |
15 |
5 |
15 |
5 |
15 |
5 |
15 |
5 |
15 |
5 |
15 |
5 |
15 |
5 |
15 |
5 |
15 |
|
Population
finale en levures (cell/ml) |
incomptable |
1,25.104 |
1,29.104 |
174 |
125 |
425 |
333 |
1080 |
1055 |
14 |
10 |
37 |
26 |
|||||
|
Facteur
de réduction de la population (%) |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
11,7 |
8,8 |
98,8 |
99,1 |
97 |
97,6 |
10 |
12,1 |
98,8 |
99,2 |
97 |
97,8 |
Tableau 4 : Résultats des tests pour chacune des modalités – Cellules vivantes après contact (ou non pour les modalités Témoin) avec le produit désinfectant – Moyenne des 2 répétitions
Commentaires :
A partir d’une population initiale de 107 cellules vivantes/ml, les populations résiduelles après contact avec le produit désinfectant, sont importantes et incomptables (modalités 3 à 6) comme pour les 2 modalités Témoin (modalités 1 et 2).
A partir d’une population initiale de 105 et 104 cellules vivantes/ml, les résultats sont très proches. Les populations initiales sont bien retrouvées sur les modalités Témoin (7, 8, 13, 14).
De même, après contact avec le DESOGERME NMI® à 2%, la réduction de la population de levures est de 98,8 % après 5 minutes de contact et de 99,1 à 99,2 % après 15 minutes de contact.
Après contact avec le DESOGERME NMI® à 1%, la réduction de la population levurienne est de 97% après 5 minutes de contact et de 97,6 à 97,8 % après 15 minutes de contact.
Par rapport à un contact de 5 minutes, l’efficacité du produit désinfectant DESOGERME NMI® est supérieure de 27 % en moyenne (de 22 à 30%), avec un temps de contact de 15 minutes.
Dans les conditions de l’étude, au laboratoire, à partir de population de levures du genre Brettanomyces de l’ordre de 104 et 103 cellules vivantes/ml, la mise en contact avec le produit DESOGERME NMI® en milieu liquide, entraîne une réduction de 97% de la population levurienne quand le temps de contact est de 5 minutes, pour une concentration de 1% et une réduction de 98,8% pour une concentration de 2%.
Ces taux passent respectivement à 97,7 et 99,2% quand le temps de contact est